Diabetologia：激活但功能受损的潜意识Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现胰脏自身HIV到再次出现1型号乳癌药理学病征的方面率在青少年初期就有很好的描绘，多个胰脏自身HIV阴性的青少年里有70%在毒素转换后10短期内复发乳癌，而随访15年的青少年这一人口比例降低到84%。总体而言，占药理学1型号乳癌一半以上的型号1型号乳癌的肺癌功能还不能获取前提的学术研究。

越来越多的人开始使用分期系统设计来下定义1型号乳癌的方面：有机体在再次出现多种胰脏自身HIV时进入第1此前，再次出现皮质醇异常时进入第2此前，再次出现病征时进入第3此前。一些多发胰脏自身HIV阴性的有机体，在1期和2期，方面更快，并发展为肺癌的1型号乳癌。我们此前描绘了除此以外成员在首次测定到多种胰脏自身HIV抽取后至极少10年无乳癌的极迟方面者，这组成员患儿总人数极少，但特征相当指明。随后，我们发现胰脏自身蛋白基因表达出来CD8+T肝细胞质姪化在方面更快的患儿里大体上不假定，但在近期肺癌和长期以来假定的乳癌患儿里很容易测定到。这也许指出，与方面患儿相比较，这些患儿自身免疫质姪化的可调增强。

一时期学术研究指出，尽管可调性T肝细胞(Treg)比例正常，但乳癌患儿假定一些功用有缺陷，其里最主要对IL-2的质姪化能力降低。此外，乳癌患儿里的震荡CD4+T肝细胞也许对可调越来越具抵抗性，乏善可陈为震荡T肝细胞的抑止减弱，自然导致的Treg和排泄导致的诱导Treg，以及蛋白经历的CD4+T肝细胞里IL-2质姪化减弱。本学术研究的目的是描绘了CD4+可调性T肝细胞(Treg)在这群人极更快方面者里的特征，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

步骤：BOX学术研究是一项以人群系统化的平行学术研究，在21岁不限发病的患儿亲属里检查1型号乳癌的致命因素。我们此前描绘了长期以来更快方面者的特征，他们保持多重胰脏自身HIV阴性超过10年，但不能再次出现乳癌的药理学病征，迟性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持无乳癌并愿意提供大量血浆抽取的更快方面者纳入T和B肝细胞功用分析。在现此前的学术研究里，8名迟方面者(SP组成员)，里位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身HIV阴性。所有的组织者都处于1型号乳癌方面的1期，尽管一些人随后保住了胰脏自身HIV对某些蛋白的阴性质姪化，然而，一名患儿仍未处于2期至极少6年，但不能再次出现药理学病征，一名患儿被诊断为乳癌，该受试者72岁，在通过观察实验抽取时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里对该NAD透过了直接审核。除去外周血单个氘肝细胞(PBMCs)，选用多参数流式肝细胞术和T肝细胞抑止次测试审核NAD里Treg的频带、变异号和功用。使用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和紧接著)透过无监督聚类分析，审核Treg变异号。

结果：与有益NAD相比较，来自迟方面体的梦境CD4+T肝细胞的监督聚类指出，触发的梦境CD4+ Treg频带降低，与低剂量诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来降低有关。一名HbA1c急剧下降的患儿与方面更快者和转换的对照组成员相比较，Treg谱有所多种不同。功用结果指出，与有益NAD相比较，来自更快方面体的Treg诱导的CD4+震荡T肝细胞抑止显着受损。乏善可陈为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134表达出来的抑止降低。

绘出1 深入的变异号分析指出，CD4+Treg流感病毒号在迟方面队列里降低。由FlowSOM聚合的Treg三楼，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标有物表达出来确认出10个元簇:梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;文件系统设计Treg_1;文件系统设计Treg_2;文件系统设计Treg_3;和文件系统设计Treg_4。(a)使用9个多种不同Treg标有聚合的10个元簇的MST。每个路由表代表一个战斗群(100个战斗群)，越来越大的元战斗群(10个元战斗群)在路由表组成员周围上色。每个路由表里的甜品绘出回应单个标有的表达出来级别。(b)每个元聚类的热绘出，以指出总体标有表达出来。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)聚合绘出，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较核素为每个metacluster木箱该线绘出(核素> 0.05%)考虑到为HD和SP组成员:文件系统设计Treg_2 (e),文件系统设计Treg_3 (f),文件系统设计Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T肝细胞(l)。粉红色左上角代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检查。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 使用CITRUS的预测模型号证实，Treg频带的降低是方面更快的标志。标准除此以外(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP组织者和转换的HD组织者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l有机体的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR表达出来透过除去，模拟FlowSOM有机体。(b) HD(黑点)和SP(杂色)组成员以及NADSP 606(粉红色)里CD25+ cd127的频带核心内容绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外邻域的木箱该线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统设计Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统设计Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统设计Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统设计T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来高强度着色，标记突出的簇被定位为SP和HD队列之间的多种不同。(j)木箱该线绘出指出了在SP(杂色)和HD(灰点)组成员里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相较核素(人口比例)。(k)直方绘出指出每个簇的变异号(粉红色)和Treg标有相较表达出来与背景表达出来(蓝色);上列，文件系统设计Treg_3;前面偷偷地，文件系统设计Treg_4。背景与所有其他簇里标有的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检查

绘出3 与有益献血者相比较，方面更快者梦境treg的GITR降低。每个梦境CD4+T肝细胞元簇(梦境T肝细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T肝细胞;HLA-DR + GITR +梦境T肝细胞;文件系统设计Treg_2;文件系统设计Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表达出来标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出来热绘出(sp606不最主要在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表达出来串接，指出直方绘出(c)和核心内容绘出(d)。Wilcoxon分组符号秩和检查，p< 0.07(粉红色)所有NAD最主要，p< 0.05(蓝色)NADSP 606和转换的HD不最主要在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表达出来，从标准除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)串接，指出直方绘出(e)和核心内容绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检查

绘出4 来自更快方面的CD4+ treg肝细胞控制震荡CD4+T肝细胞的能力降低。SP组成员用蓝色的该线和左上角回应，HD组成员用银色的该线和左上角回应，粉红色的该线/左上角回应NADsp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被标有为CFSE, Treg按检视的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，人才3天后透过流式肝细胞术测定。(a-d)与CD4+接收者者相较应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止多于。使用阴性对照(触发的响应肝细胞不含treg)算出抑止多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 震荡CD4+T肝细胞对更快方面的T肝细胞重置的抑止越来越脆弱。SP组成员用蓝色的该线和左上角回应，HD组成员用银色的该线和左上角回应，粉红色的该线/左上角回应NADsp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标有，treg按检视的人口比例溶液。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，人才3天后透过流式肝细胞术(CD25反染)和肝细胞因姪分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百分率(b)。(c,d) CD25抑止百分率(c)和CD134抑止百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们结论的推论是，来自更快方面姪的重置梦境CD4+Treg在GITR表达出来里获取了扩充和非常丰富，突显了进一步学术研究Treg在1型号乳癌几率有机体里的关联性的全面性。

记事记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28