Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肝炎患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出有现去甲自身抗纤到再次出有现1DF白血病医学病征的方面率在儿童一时期就有很好的揭示，多个去甲自身抗纤非典型的儿童中所有70%在肝细胞转换后10年内患上白血病，而随访15年的儿童这一%-减少到84%。比起之下，占医学1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的病症系统还没有人获取确实的研究课题。

愈加多的人开始采用分期系统来定义1DF白血病的方面：生殖在再次出有现多种去甲自身抗纤时踏入第1下一阶段，再次出有现血糖反常时踏入第2下一阶段，再次出有现病征时踏入第3下一阶段。一些多发去甲自身抗纤非典型的生殖，在1期和2期，方面速度快，并发展为病症的1DF白血病。我们之前揭示了一第一组在首次样品到多种去甲自身抗纤采样后仅仅10年无白血病的极慢方面者，这第一组病征人数少，但大体特征比较恰当。随后，我们发现去甲自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞会反应将在方面加速的病征中所大体不依赖于，但在近期病症和经常性依赖于的白血病病征中所很较难样品到。这可能表明，与方面病征比起，这些病征自身免疫的缓冲提高。

早期研究课题表明，尽管缓冲性T细胞会(Treg)使用量再次出有现异常，但白血病病征依赖于一些机能缺陷，其中所还包括对IL-2的反应将能力增大。此外，白血病病征中所的effectCD4+T细胞会可能对缓冲更具抵抗性，显出有为effectT细胞会的抑止西移动，纯净消除的Treg和纤外消除的抑制Treg，以及淋巴细胞历程的CD4+T细胞会中所IL-2反应将西移动。本研究课题的最终目标是揭示了CD4+缓冲性T细胞会(Treg)在一小群极加速方面者中所的大体特征，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX研究课题是一项以人群辅以的侧向研究课题，在21岁请注意确诊的病征亲戚中所核查1DF白血病的险恶环境因素。我们之前揭示了经常性加速方面者的大体特征，他们依然多重去甲自身抗纤非典型多达10年，但没有人再次出有现白血病的医学病征，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续依然无白血病并愿意提供大量血液采样的加速方面者扩及T和B细胞会机能量化。在现阶段的研究课题中所，8名慢方面者(SP第一组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身抗纤非典型。所有的举例来说都处于1DF白血病方面的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗纤对某些淋巴细胞的橘红色，然而，一名病征已经处于2期仅仅6年，但没有人再次出有现医学病征，一名病征被诊断为白血病，该患者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中所对该NADP同步进行了实质上量化报告。分离外周血单个核子细胞会(PBMCs)，采用多意味着流式细胞会拳法和T细胞会抑止实验量化报告NADP中所Treg的kHz、表DF和机能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和重回)同步进行无监督聚类量化，量化报告Treg表DF。

结果：与保健NADP比起，来自慢方面纤的知觉CD4+T细胞会的监督聚类推断，激来时的知觉CD4+ TregkHz减少，与糖皮质激素抑制的TNFR相关蛋白(GITR)表述减少有关。一名HbA1c下降时的病征与方面加速者和意味着的依此第一组比起，Treg对光略有并不相同。机能量化表明，与保健NADP比起，来自加速方面纤的Treg激活的CD4+effectT细胞会抑止显著受损。显出有为对effectCD4+T细胞会CD25和CD134表述的抑止减少。

左图1 透彻的表DF量化推断，CD4+Treg亚DF在慢方面函数调用中所减少。由FlowSOM降解的Treg二楼，聚集在来自所有NADP的来时CD4+CD45RA -细胞会上。根据上标物表述断定出有10个元簇:知觉T细胞会_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞会;HLA-DR + GITR +知觉T细胞会;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)采用9个并不相同Treg上标降解的10个元簇的MST。每个端口代表一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在端口第一组周围上色。每个端口中所的糕左图暗示单个上标的表述级别。(b)每个元聚类的热左图，以推断整纤上标表述。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)降解左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下数量级为每个metacluster盒新线左图(数量级> 0.05%)确定为HD和SP第一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞会(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞会(l)。橘色边框代表捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 采用CITRUS的预测模DF证实，TregkHz的减少是方面加速的字样。分级依赖型(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP举例来说和意味着的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述同步进行分离，虚拟FlowSOM族群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及NADPSP 606(橘色)中所CD25+ cd127的kHz简介左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的盒新线左图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出有的簇被识别为SP和HD函数调用之间的并不相同。(j)盒新线左图推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组中所，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相比之下数量级(%-)。(k)直方左图推断每个簇的表DF(粉红色)和Treg上标相比之下表述与氛围表述(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。氛围与所有其他簇中所上标的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验

左图3 与保健献血者比起，方面加速者知觉treg的GITR减少。每个知觉CD4+T细胞会元簇(知觉T细胞会_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞会;HLA-DR + GITR +知觉T细胞会;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表述上标的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表述热左图(sp606不还包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表述串联，推断直方左图(c)和简介左图(d)。Wilcoxon配对大写秩和检验，p< 0.07(橘色)所有NADP还包括，p< 0.05(浅蓝色)NADPSP 606和意味着的HD不还包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表述，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橘色)串联，推断直方左图(e)和简介左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检验

左图4 来自加速方面的CD4+ treg细胞会控制effectCD4+T细胞会的能力增大。SP第一组用浅蓝色的新线和边框暗示，HD第一组用灰色的新线和边框暗示，橘色的新线/边框暗示NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上标为CFSE, Treg按判读的%-高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠来时化细胞会，人才培养3紧接著同步进行流式细胞会拳法样品。(a-d)与CD4+反之亦然者相比之下应将的treg人才培养(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止%-。采用非典型依此(激来时的响应将细胞会不含treg)计算抑止%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 effectCD4+T细胞会对加速方面的T细胞会来时化的抑止更敏感。SP第一组用浅蓝色的新线和边框暗示，HD第一组用灰色的新线和边框暗示，橘色的新线/边框暗示NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会同步进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上标，treg按判读的%-高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠来时化细胞会，人才培养3紧接著同步进行流式细胞会拳法(CD25反染)和细胞会因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止调升(b)。(c,d) CD25抑止调升(c)和CD134抑止调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中所的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们算出有的结论是，来自加速方面子的来时化知觉CD4+Treg在GITR表述中所获取了引入和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1DF白血病风险生殖中所的异质性的有效性。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28