Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1HG糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到去甲自身免疫到用到1型号肾病诊断疼痛的令人满意率在成年人时期就有很好的叙述，多个去甲自身免疫非典型的成年人中的有70%在血清转换后10月内中风肾病，而随访15年的成年人这一比率上升到84%。比起之下，%诊断1型号肾病一半以上的型号1型号肾病的中风机制还没有得到充分的科学研究。

越来越多的人开始采用分期系统来定义1型号肾病的令人满意：个锥体在用到多种去甲自身免疫时进到第1过渡阶段，用到血糖异常时进到第2过渡阶段，用到疼痛时进到第3过渡阶段。一些多发去甲自身免疫非典型的个锥体，在1期和2期，令人满意较太快，并发展为中风的1型号肾病。我们之前叙述了一四组在首次样品到多种去甲自身免疫样本后至少10年无肾病的正因如此太快令人满意者，这四组患儿人数少，但特点相当明确。随后，我们注意到去甲自身肽质特异性CD8+T细胞会反应会在令人满意较快的患儿中的基本不依赖于，但在近期中风和长期依赖于的肾病患儿中的很容易样品到。这显然得出结论，与令人满意患儿比起，这些患儿自身特异性会的调节减慢。

早期科学研究得出结论，尽管调节性T细胞会(Treg)比例较长时间，但肾病患儿依赖于一些功能缺陷，其中的有数对IL-2的反应会能力增高。此外，肾病患儿中的的effectCD4+T细胞会显然对调节更具抵抗性，表现为effectT细胞会的诱发减弱，自然环境产生的Treg和锥体外产生的诱导Treg，以及肽质经历的CD4+T细胞会中的IL-2反应会减弱。本科学研究的目的是叙述了CD4+调节性T细胞会(Treg)在大群正因如此较快令人满意者中的的特点，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX科学研究是一项以人群为基础的侧向科学研究，在21岁以下确诊的患儿直系亲属中的检查1型号肾病的凶险因素。我们之前叙述了长期较快令人满意者的特点，他们保持多重去甲自身免疫非典型高达10年，但没有用到肾病的诊断疼痛，太快性或非外阴自身免疫。随后，10名继续保持无肾病并主动给予大量肠道样本的较快令人满意者纳入T和B细胞会功能分析。在现今的科学研究中的，8名太快令人满意者(SP四组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的去甲自身免疫非典型。所有的参加者都处于1型号肾病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身免疫对某些肽质的非典型反应会，然而，一名患儿早就处于2期至少6年，但没有用到诊断疼痛，一名患儿被诊断为肾病，该人会72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在科研人员中的对该NADP进行时了直接审核。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多变量流式细胞会术和T细胞会诱发次测试审核NADP中的Treg的增益、性状号和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、相关联和复出)进行时无委派聚类分析，审核Treg性状号。

结果：与肥胖症NADP比起，来自太快令人满意锥体的潜意识CD4+T细胞会的委派聚类揭示，激活的潜意识CD4+ Treg增益上升，与利尿剂诱导的TNFR相关肽(GITR)强调上升有关。一名HbA1c下降的患儿与令人满意较快者和冗余的对照四组比起，Treg谱有所并不相同。功能分析得出结论，与肥胖症NADP比起，来自较快令人满意锥体的Treg介导的CD4+effectT细胞会诱发微小受损。表现为对effectCD4+T细胞会CD25和CD134强调的诱发上升。

布1 深入的性状号分析揭示，CD4+Treg亚型号在太快令人满意路由表中的上升。由FlowSOM生成的Treg房，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标识物强调鉴别出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)采用9个并不相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个数据流亦然一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在数据流四组区域内上色。每个数据流中的的饼布声称单个标识的强调级别。(b)每个元聚类的热布，以揭示整锥体标识强调。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)生成布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对数量级为每个metacluster装入曲新线布(数量级> 0.05%)考虑到为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。深蓝色橘色亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩核查。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 采用CITRUS的系统结构号证实，Treg增益的上升是令人满意较快的红色。分级制度门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参加者和冗余的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞会上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的亦然性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调进行时分离，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(外缘)和SP(白斑)四组以及NADPSP 606(深蓝色)中的CD25+ cd127的增益汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控同构的装入曲新线布;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)玉米簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD路由表间的并不相同。(j)装入曲新线布揭示了在SP(白斑)和HD(灰点)四组中的，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对数量级(比率)。(k)直方布揭示每个簇的性状号(粉红色)和Treg标识相对强调与时代背景强调(红色);上列，CPUTreg_3;下面正要，CPUTreg_4。时代背景与所有其他簇中的标识的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩核查

布3 与肥胖症献血者比起，令人满意较快者潜意识treg的GITR上升。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个强调标识的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的强调热布(sp606不有数在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中的所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR强调联接，揭示直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon配对小写秩和核查，p< 0.07(深蓝色)所有NADP有数，p< 0.05(红色)NADPSP 606和冗余的HD不有数在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR强调，从分级制度门控，从所有HD(棕色)、所有SP(红色)和SP 606(深蓝色)联接，揭示直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩核查

布4 来自较快令人满意的CD4+ treg细胞会依靠effectCD4+T细胞会的能力增高。SP四组用红色的新线和橘色声称，HD四组用蓝色的新线和橘色声称，深蓝色的新线/橘色声称NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行时分选。CD4+CD25−(应答者)被标识为CFSE, Treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠增生细胞会，培育出3天后进行时流式细胞会术样品。(a-d)与CD4+应答者相对应的treg培育出(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培育出。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE诱发%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发%-。采用非典型对照(激活的拥护细胞会不含treg)计算诱发%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 effectCD4+T细胞会对较快令人满意的T细胞会增生的诱发更引人注意。SP四组用红色的新线和橘色声称，HD四组用蓝色的新线和橘色声称，深蓝色的新线/橘色声称NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行时分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标识，treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠增生细胞会，培育出3天后进行时流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培育出。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE诱发%-(b)。(c,d) CD25诱发%-(c)和CD134诱发%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中的的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较快令人满意子的增生潜意识CD4+Treg在GITR强调中的得到了扩展和丰沛，强调了必要性科学研究Treg在1型号肾病不确定性个锥体中的的异质性的必要。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28