Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中不断扩展

从第一次浮现胰脏自身抗质到浮现1标准型肝炎针灸副作用的困难重重率在幼儿时期就有不错的说明了，多个胰脏自身抗质感染性的幼儿中会有70%在血清叠加后10年内患上肝炎，而随访15年的幼儿这一%-提高到84%。正因如此之下，占针灸1标准型肝炎一半以上的标准型1标准型肝炎的胃癌机制还没有人得到合理的研究成果。

日益多的人开始运用于分期系统来表述1标准型肝炎的困难重重：个质在浮现多种胰脏自身抗质时转回第1过渡阶段，浮现浓度异常时转回第2过渡阶段，浮现副作用时转回第3过渡阶段。一些多发胰脏自身抗质感染性的个质，在1期和2期，困难重重较慢，并拓展为胃癌的1标准型肝炎。我们之前说明了了一组在首次检查到多种胰脏自身抗质样品后仅仅10年无肝炎的以致于慢困难重重者，这组病人人数寡，但构造比较恰当。随后，我们注意到胰脏自身抗原特异性CD8+T细胞核反应在困难重重极快的病人中会前提不实际上，但在现阶段胃癌和长期以来实际上的肝炎病人中会很易于检查到。这或许表明，与困难重重病人正因如此，这些病人自身突变的调节增强。

早期研究成果表明，尽管调节性T细胞核(Treg)数量正常，但肝炎病人实际上一些功能缺陷，其中会仅限于对IL-2的反应能力增加。此外，肝炎病人中会的现像CD4+T细胞核或许对调节更具抵抗性，展现出为现像T细胞核的减缓减弱，自然产生的Treg和质外产生的诱导Treg，以及抗原境况的CD4+T细胞核中会IL-2反应减弱。本研究成果的意在是说明了了CD4+调节性T细胞核(Treg)在这群人以致于极快困难重重者中会的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

法则：BOX研究成果是一项以人群为基础的平行研究成果，在21岁以下确诊的病人亲戚中会检查1标准型肝炎的危险因素。我们之前说明了了长期以来极快困难重重者的构造，他们保持多重胰脏自身抗质感染性最多10年，但没有人浮现肝炎的针灸副作用，慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名在此之后保持无肝炎并愿意发放大量血液样品的极快困难重重者纳入T和B细胞核功能分析法则。在目前的研究成果中会，8名慢困难重重者(SP组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的胰脏自身抗质感染性。所有的参与者都保持稳定1标准型肝炎困难重重的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗质对某些抗原的感染性反应，然而，一名病人已经保持稳定2期仅仅6年，但没有人浮现针灸副作用，一名病人被诊疗为肝炎，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析法则中会对该供质进行时了单独分析法则。分离外周血单个核反应细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核术和T细胞核减缓试验分析法则供质中会Treg的阈值、表标准型和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)进行时无监督聚类分析法则，分析法则Treg表标准型。

结果：与身体健康供质正因如此，来自慢困难重重质的心灵CD4+T细胞核的监督聚类说明了，作用于的心灵CD4+ Treg阈值提高，与持续性诱导的TNFR特别复合物(GITR)暗示提高有关。一名HbA1c急剧下降的病人与困难重重极快者和匹配的对照组正因如此，Treg五音各有不同。功能分析法则表明，与身体健康供质正因如此，来自极快困难重重质的Treg介导的CD4+现像T细胞核减缓明显受损。展现出为对现像CD4+T细胞核CD25和CD134暗示的减缓提高。

平面图1 侧重的表标准型分析法则说明了，CD4+Treg亚标准型在慢困难重重函数调用中会提高。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有供质的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据上标物暗示鉴定出10个元簇:心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个不同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个空降兵(100个空降兵)，较大的元空降兵(10个元空降兵)在节点组周围上色。每个节点中会的饼平面图回应单个上标的暗示级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整质上标暗示。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)正因如此核素为每个metacluster罐新线平面图(核素> 0.05%)确切为HD和SP组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核(l)。橙色白点值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg阈值的提高是困难重重极快的标志。分级门控(a - f)和棉花分析法则(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的值得一提的是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示进行时分离，模拟FlowSOM群质。(b) HD(白点)和SP(白斑)组以及供质SP 606(橙色)中会CD25+ cd127的阈值汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控有界的罐新线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示其中会心着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD函数调用二者之间的不同。(j)罐新线平面图说明了了在SP(白斑)和HD(灰点)组中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的正因如此核素(%-)。(k)直方平面图说明了每个簇的表标准型(粉红色)和Treg上标正因如此暗示与背景暗示(金色);上列，磁盘Treg_3;上头恰巧，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中会上标的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查

平面图3 与身体健康献血者正因如此，困难重重极快者心灵treg的GITR提高。每个心灵CD4+T细胞核元簇(心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个暗示上标的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的暗示热平面图(sp606不仅限于在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR暗示联结，说明了直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查，p< 0.07(橙色)所有供质仅限于，p< 0.05(金色)供质SP 606和匹配的HD不仅限于在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)联结，说明了直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查

平面图4 来自极快困难重重的CD4+ treg细胞核控制现像CD4+T细胞核的能力增加。SP组用金色的新线和白点回应，HD组用黑色的新线和白点回应，橙色的新线/白点回应供质sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被上标为CFSE, Treg按判读的%-溶液。用抗CD3 /28微珠诱导细胞核，培植3天后进行时流式细胞核术检查。(a-d)与CD4+；也者正因如此应的treg培植(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培植。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE减缓%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓%-。运用于感染性对照(作用于的响应细胞核分别为treg)计算减缓%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析法则。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现像CD4+T细胞核对极快困难重重的T细胞核诱导的减缓更恰当。SP组用金色的新线和白点回应，HD组用黑色的新线和白点回应，橙色的新线/白点回应供质sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上标，treg按判读的%-溶液。用抗CD3 /28微珠诱导细胞核，培植3天后进行时流式细胞核术(CD25反染)和特异性分析法则。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培植。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE减缓前年(b)。(c,d) CD25减缓前年(c)和CD134减缓前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中会的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析法则。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得出的正确性是，来自极快困难重重子的诱导心灵CD4+Treg在GITR暗示中会得到了扩展和丰富，重申了进一步研究成果Treg在1标准型肝炎后果个质中会的异质性的合理性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28