Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肾脏自身免疫球蛋白到显现1改型高血压药理学疼痛的困难重重领军在学童初期就有良好的描述，多个肾脏自身免疫球蛋白阴性的学童中会有70%在血清切换后10年内患上高血压，而随访15年的学童这一比领军增高到84%。来得之下，占到药理学1改型高血压一半以上的改型1改型高血压的发作机制还没给予充分的系统对地研究。

越来越多的人开始可用分期系统对来表述1改型高血压的困难重重：变异在显现多种肾脏自身免疫球蛋白时转回第1前期，显现血糖异常时转回第2前期，显现疼痛时转回第3前期。一些多发肾脏自身免疫球蛋白阴性的变异，在1期和2期，困难重重较比较慢，并持续发展为发作的1改型高血压。我们前描述了一小组在首次样品到多种肾脏自身免疫球蛋白样本后数10年无高血压的极比较慢困难重重者，这小组病变人数少，但特征非常明确。随后，我们发现肾脏自身复合物特异性CD8+T巨噬细胞催化以在困难重重极快的病变中会基本不共存，但在近来发作和经常性共存的高血压病变中会很容易样品到。这可能得出结论，与困难重重病变来得，这些病变自身免疫催化以的适度增强。

早期系统对地研究得出结论，尽管适度性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但高血压病变共存一些机制缺陷，其中会还包括对IL-2的催化以战斗能力增高。此外，高血压病变中会的波动以CD4+T巨噬细胞可能对适度格外具抵抗性，表现为波动以T巨噬细胞的可抑制向西移动，自然激发的Treg和游离激发的游离Treg，以及复合物经历的CD4+T巨噬细胞中会IL-2催化以向西移动。本系统对地研究的目地是描述了CD4+适度性T巨噬细胞(Treg)在一个大极极快困难重重者中会的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX系统对地研究是一项以人群为基础的主干系统对地研究，在21岁请注意确诊的病变亲属中会检查1改型高血压的致命因素。我们前描述了经常性极快困难重重者的特征，他们维持多重肾脏自身免疫球蛋白阴性超过10年，但没显现高血压的药理学疼痛，比较慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续维持无高血压并乐意提供大量纤内样本的极快困难重重者不属于T和B巨噬细胞机制统计分析。在现今的系统对地研究中会，8名比较慢困难重重者(SP小组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肾脏自身免疫球蛋白阴性。所有的行动者都受制于1改型高血压困难重重的1期，尽管一些人随后一落千丈了肾脏自身免疫球蛋白对某些复合物的阴性催化以，然而，一名病变不太可能受制于2期数6年，但没显现药理学疼痛，一名病变被诊断为高血压，该测试者72岁，在野外试验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中会对该小分子同步进行了单独检验。分开外周血单个氢巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞忍术和T巨噬细胞可抑制试验检验小分子中会Treg的基频、表改型和机制。可用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和重归)同步进行无指导聚类统计分析，检验Treg表改型。

结果：与健康小分子来得，来自比较慢困难重重纤的思绪CD4+T巨噬细胞的指导聚类推测，转录命的思绪CD4+ Treg基频增高，与糖皮质激素游离的TNFR相关复合物(GITR)解读增高有关。一名HbA1c上升时的病变与困难重重极快者和冗余的比对小组来得，Treg曲谱有所不同。机制推断，与健康小分子来得，来自极快困难重重纤的Treg诱导的CD4+波动以T巨噬细胞可抑制明显受损。表现为对波动以CD4+T巨噬细胞CD25和CD134解读的可抑制增高。

平面图1 系统对地的表改型统计分析推测，CD4+Treg亚改型在比较慢困难重重函数调用中会增高。由FlowSOM填充的Treg会议室，周围在来自所有小分子的活命CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标识物解读比对成10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)可用9个不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个路由器象征性一个坦克部队(100个坦克部队)，很大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器小组周围上色。每个路由器中会的饼平面图对此单个标识的解读档次。(b)每个元聚类的热平面图，以推测整纤标识解读。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)填充平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)相较数量级为每个metacluster木箱中会央等分(数量级> 0.05%)明确为HD和SP小组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。橘色带子象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 可用CITRUS的预测得出结论，Treg基频的增高是困难重重极快的标志。评定旁路(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP行动者和冗余的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的象征性性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行分开，各种类改型FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)小组以及小分子SP 606(橘色)中会CD25+ cd127的基频摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路有界的木箱中会央等分;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读高强度着色，标记值得注意的簇被识别为SP和HD函数调用相互间的不同。(j)木箱中会央等分推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较数量级(比领军)。(k)直方平面图推测每个簇的表改型(深蓝色)和Treg标识相较解读与或多或少解读(深蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面悄悄，磁盘Treg_4。或多或少与所有其他簇中会标识的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与健康献血者来得，困难重重极快者思绪treg的GITR增高。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读标识的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的解读热平面图(sp606不还包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR解读串联，推测直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有小分子还包括，p< 0.05(深蓝色)小分子SP 606和冗余的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR解读，从评定旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)串联，推测直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自极快困难重重的CD4+ treg巨噬细胞控制波动以CD4+T巨噬细胞的战斗能力增高。SP小组用深蓝色的中会央线和带子对此，HD小组用金色的中会央线和带子对此，橘色的中会央线/带子对此小分子sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(应以答者)被标识为CFSE, Treg按观察的比领军硫酸铜。用抗CD3 /28微珠活命化巨噬细胞，培养成来3同月同步进行流式巨噬细胞忍术样品。(a-d)与CD4+应以答者相较应以的treg培养成来(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者培养成来。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE可抑制比领军(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比领军。可用阴性比对(转录命的自发以巨噬细胞不含treg)计算可抑制比领军。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 波动以CD4+T巨噬细胞对极快困难重重的T巨噬细胞活命化的可抑制格外敏感。SP小组用深蓝色的中会央线和带子对此，HD小组用金色的中会央线和带子对此，橘色的中会央线/带子对此小分子sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel标识，treg按观察的比领军硫酸铜。用抗CD3 /28微珠活命化巨噬细胞，培养成来3同月同步进行流式巨噬细胞忍术(CD25反染)和巨噬生长因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者携手培养成来。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE可抑制百份(b)。(c,d) CD25可抑制百份(c)和CD134可抑制百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养成来中会的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得成的结论是，来自极快困难重重子的活命化思绪CD4+Treg在GITR解读中会给予了扩展和非常丰富，凸显了格外进一步系统对地研究Treg在1改型高血压风险变异中会的异质性的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28